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粗纖維是植物性樣品中難以被消化或分解的成分的統(tǒng)稱,主要包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、少量的果膠及角質(zhì)等等。纖維素是由葡萄糖鏈構(gòu)成的線性多糖,是植物細胞壁的主要成分;半纖維素是由多種單糖組成的雜多糖,如木聚糖、阿拉伯聚糖等,與纖維素交織存在;木質(zhì)素是非碳水化合物,由苯丙烷單元聚合而成,賦予植物結(jié)構(gòu)剛性。膳食纖維等于粗纖維+加可溶性纖維(果膠等)加更完整的半纖維素。膳食纖維是現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)的**概念,更貼近人體健康需求。在食品、醫(yī)療等領(lǐng)域,膳食纖維已成為主流指標;而飼料行業(yè)雖保留粗纖維,但逐步轉(zhuǎn)向更精細的纖維組分分析。
粗纖維的測定方法主要有傳統(tǒng)的Weende法(范氏洗滌法)、VanSoest法(洗滌纖維分析法)、酶解法(如AOAC985.29方法)、近紅外光譜法(NIRS)。這4種方法各有其優(yōu)劣勢和適用的場景,以下是方法的詳細介紹。
1.Weende法(范氏洗滌法)其原理是通過酸和堿的連續(xù)煮沸溶解樣品中的非纖維成分,例如淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等,剩余殘渣即為粗纖維。步驟一般是樣品經(jīng)過1.25%的稀硫酸煮沸30min,過濾后用1.25%的氫氧化鈉煮沸30min,*后干燥并稱重,計算粗纖維含量。其優(yōu)勢是操作簡單、成本低、對設(shè)備的要求不高、適用于常規(guī)飼料分析。不足之處是不能完全分離木質(zhì)素和纖維素、測定值偏低;半纖維素和部分木質(zhì)素被溶解,結(jié)果不準確。
2.VanSoest法(洗滌纖維分析法)可以區(qū)分不同的纖維組分,廣泛的應(yīng)用于科研和飼料工業(yè)。測定中性洗滌纖維(NDF)的原理是使用中性洗滌劑(含十二烷基硫酸鈉)溶解細胞內(nèi)容物,剩余殘渣包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素和礦物質(zhì)。優(yōu)勢是能夠反映植物細胞壁總含量,適用于反芻動物飼料的評價,不足是無法區(qū)分纖維素、半纖維素和木質(zhì)素。測定酸性洗滌纖維(ADF)的原理是在酸性條件下溶解半纖維素、剩余殘渣為纖維素、木質(zhì)素和礦物質(zhì)。測定酸性洗滌木質(zhì)素的原理是用72%的硫酸處理ADF殘渣,溶解纖維素,剩余為木質(zhì)素和灰分,可以單獨測定木質(zhì)素含量。
3.酶解法(如AOAC985.29方法)原理是利用例如蛋白酶、淀粉酶模擬人體消化過程,分解可消化成分,剩余殘渣為總膳食纖維,更接近生理實際,適用于食品營養(yǎng)標簽;酶解法可以區(qū)分可溶性和不溶性膳食纖維。不足之處在于酶的活性易受環(huán)境影響,步驟繁瑣,而且需要嚴格控溫,整體耗時較長。
4.近紅外光譜法做為一種快檢方法,它通過近紅外光譜特征快速預(yù)測纖維含量,不過需要先建立校準模型。以上4種方法各有優(yōu)略勢,可根據(jù)不同的應(yīng)用場景去選擇。以下是簡單總結(jié)的各種方法對比與選擇建議。
膳食纖維含量的檢測方法根據(jù)GB/T5009.88—2008《食品中膳食纖維的測定》采用酶重量法進行測定,干燥試樣經(jīng)熱穩(wěn)定a-淀粉酶、蛋白酶和葡萄糖苷酶酶解消化去除蛋白質(zhì)和淀粉后,經(jīng)乙醇沉淀、抽濾,殘渣用乙醇和**洗滌,干燥稱量,即為總膳食纖維殘渣。另取試樣同樣酶解,直接抽濾并用熱水洗滌,殘渣干燥稱量,即得不溶性膳食纖維殘渣;濾液用1倍體積的乙醇沉淀、抽濾、干燥稱量,得可溶性膳食纖維殘渣??鄢黝惿攀忱w維殘渣中相應(yīng)的蛋白質(zhì)、灰分和試劑空白含量,即可計算出試樣中總的、不溶性和可溶性膳食纖維含量。方法流程如下圖所示。
意大利VELP有分析膳食纖維的完整解決方案。VELP的膳食纖維分析系統(tǒng)依據(jù)國標方法設(shè)計由酶解系統(tǒng)和過濾系統(tǒng)組成。GDE的磁力攪拌器通過持續(xù)不斷地攪拌樣品來確保樣品的均勻性,同時避免過熱而影響酶解的效果;設(shè)置無人值守操作的定時器,您可以快速設(shè)定操作時間,并專注于其他任務(wù)。這種VELP組合可以按照官方的AOAC(總膳食纖維的測定)方法進行分析,與手工操作相比,**縮短了所需時間。CFS6過濾裝置能夠在20分鐘內(nèi)同時進行單個或多個樣品的分析,*多可同時進行6個樣品的分析,即使在滿負荷的情況下,也能在20分鐘內(nèi)完成。高效的泵可以加快過濾步驟和*后的清洗。還可以從底部注入壓縮空氣,以去除任何積聚在坩堝過濾器中的樣品,從而提高過濾質(zhì)量。